RT-PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)請注意

　　RT-PCR試劑盒反應(yīng)就是從RNA反轉(zhuǎn)錄至cDNA，然后通過PCR反應(yīng)擴(kuò)增cDNA的過程。Super一步法RT-PCR（AMV）試劑盒采用了一步反應(yīng)法完成整個RT-PCR反應(yīng)，即RNA-cDNA-PCR反應(yīng)操作在同一反應(yīng)體系中進(jìn)行，反應(yīng)過程中不需增加額外的步驟，就可完成整個RT-PCR反應(yīng)，同時整個反應(yīng)系統(tǒng)且含有電泳時所需要的試劑，可直接上樣電泳。本試劑盒具有方便、簡捷、靈敏度高、重復(fù)性好的特點(diǎn)，可適用于各種動、植物、病毒RNA的PCR檢測。

　　RT-PCR試劑盒實(shí)驗(yàn)請注意：

　　1.用戶可根據(jù)自己的情況調(diào)整優(yōu)化PCR反應(yīng)擴(kuò)增參數(shù)：

　　·退火溫度：可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)?shù)靥岣呋蚪档屯嘶饻囟龋?0℃~65℃）。

　　·延伸時間：延伸時間因目的序列長度的不同而不同

　　·循環(huán)次數(shù)：cDNA量較少時，循環(huán)次數(shù)可增加為40~50次

　　·調(diào)整鎂離子的濃度

　　2.用戶可根據(jù)本試劑盒提供的β-actin引物（陽性對照）驗(yàn)證RT-PCR體系是否良好（選做）：

　?。?）使用前每個組份輕輕混勻，然后2000rpm離心20s；

　?。?）滅過菌且無核酸酶的0.2mlPCR管，依次加入

　?。?）輕混勻，2000rpm離心20s后進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)；RT反應(yīng)條件：42℃保溫1hr PCR擴(kuò)增條件：94°C，5min；

　　94°C變性，30sec；

　　54°C退火，45s；

　　72°C延伸，1min；

　　33個循環(huán)；

　　72°C，10min，

　　（4）應(yīng)結(jié)束后，取反應(yīng)液10uL進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，確認(rèn)β-actin基因目的產(chǎn)物片斷為359bp。

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