小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒標本的采集與保存

小鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒標本的采集與保存:

1.         血清：

將收集于血清分離管的全血標本在室溫放置 2 小時或 4oC 過夜，然后 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

2.         血漿：

用 EDTA 或肝素作為抗凝劑采集標本，并將標本在采集后的 30 分鐘內于 2-8oC 1000×g 離心 15 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

3. 組織勻漿：

1） 取適量組織塊，于預冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；

2） 可同時選用多種勻漿方法達到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL 預冷PBS 進行充分研磨，該過程需在冰上進行（有條件實驗室可選用機器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復凍融 進一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復凍融法可重復2次）。

3） 將制備好的勻漿液于5000×g 離心5 分鐘，留取上清即可檢測。

4. 細胞裂解液：

1）貼壁細胞需要先用胰酶消化，離心收集細胞（懸浮細胞可直接離心收集）；

2）將收集到的細胞用冷PBS 洗3 次；

3）物理方法裂解細胞（可先超聲破碎細胞，再反復凍融）：

i 超聲破碎：取適量PBS 重懸細胞，用一定功率的超聲波處理細胞懸液，使細胞急劇震蕩破裂。

ii 反復凍融：將待破碎的細胞在-20 oC 以下冰凍，室溫融解，反復3 次，使細胞溶脹破碎。

4）將標本于2-8 oC 1500×g 離心10 分鐘，收集上清備用。

5. 細胞培養上清或其它生物標本：

請 1000×g 離心 20 分鐘，取上清即可檢測，或將上清置于-20oC 或-80oC 保存，但應避免反復凍融。

注意：

1.         以上標本均需密封保存，4oC保存應小于1周，-20oC不應超過1個月，-80oC不應超過2個月。

2.         標本使用前應緩慢均衡至室溫，不應加熱使之融解。

3.         實驗前紅細胞裂解液必須用標準品稀釋液稀釋。

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